Tyrosinase Activity Assay 프로토콜
Tyrosinase Activity Assay
1. 준비
• L-Tyrosine을 완충액1)을 이용하여 2mM L-Tyrosine 용액2)을 제조한다.
• Tyrosinase를 완충액을 이용하여 100U/mL로 희석한다.
2. 반응 혼합
• 샘플(혹은 완충액) 60µL를 96well에 넣는다.
• 2mM L-Tyrosine 용액을 각 well에 100µL씩 넣는다.
• 100U/mL Tyrosinase 용액을 각 well에 20µL씩 넣는다.
3. 흡광도 측정
• 37°C 인큐베이터에 넣고 10분간 반응시킨다.
• 마이크로플레이트 리더를 사용하여 490nm 파장에서 흡광도를 측정한다.
• 다시 37°C 인큐베이터에 넣고 5분간 반응시킨다.
• 흡광도의 변화가 나타나지 않을 때 까지(약 30분) 위 과정을 반복한다.
4. 결과분석
• 타이로시네이스 억제율을 계산한다. ((%) = [(대조군 흡광도 – 샘플군 흡광도) / 대조군 흡광도] × 100)
• 농도별 억제율을 그래프로 작성하여 샘플의 효능을 평가한다.
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• 1) 0.1M pH 6.8 Sodium phosphate buffer
• 2) L-Tyrosine은 용해도가 낮아 50°C 정도의 온도에서 용해하고, 차광된 상태에서 보관한다.
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• 필요시약
1. L-Tyrosine
2. Tyrosinase
3. 0.1M pH 6.8 Sodium phosphate buffer
