Tyrosinase Activity Assay 1. 준비  • L-Tyrosine을 완충액1)을 이용하여 2mM L-Tyrosine 용액2)을 제조한다.  • Tyrosinase를 완충액을 이용하여 100U/mL로 희석한다. 2. 반응 혼합  • 샘플(혹은 완충액) 60µL를 96well에 넣는다.  • 2mM L-Tyrosine 용액을 각 well에 100µL씩 넣는다.  • 100U/mL Tyrosinase 용액을 각 well에 20µL씩 넣는다. 3. 흡광도 측정  • 37°C 인큐베이터에 넣고 10분간 반응시킨다.  • 마이크로플레이트 리더를 사용하여 490nm 파장에서 흡광도를 측정한다.  • 다시 37°C 인큐베이터에 넣고 5분간 반응시킨다.  • 흡광도의 변화가 나타나지 않을 때 까지(약 30분) 위 과정을 반복한다. 4. 결과분석  • 타이로시네이스 억제율을 계산한다. ((%) = [(대조군 흡광도 – 샘플군 흡광도) / 대조군 흡광도] × 100)  • 농도별 억제율을 그래프로 작성하여 샘플의 효능을 평가한다. —  • 1) 0.1M pH…

1. Hematoxylin & Eosin (H&E) Staining 1. 준비 a. Hematoxylin Solution  • Hematoxylin을 증류수를 이용하여 0.5%의 농도로 용해한다. (0.5g/100mL)  • Aluminum sulfate를 5%의 농도로 추가하여 용해한다. (5g/100mL)  • 혼합된 Hematoxylin 용액을 70°C 항온조에 24시간 보관한다.  • 필터를 통해 불순물을 제거한 뒤 만들어진 Hematoxylin 용액을 차광된 상태에서 실온에 보관한다. b. Eosin Solution  • Eosin을 95% Ethanol을 이용하여 1%의 농도로 용해한다. (1g/100mL) 2. 탈파라핀화  • 슬라이드를 자일렌에 1분씩 2회 담가 파라핀을 제거한다.1)  • 재수화를 위해 100, 90, 80, 70% 에탄올 및 증류수에서 각각 2분간 담가 세척한다. 3. 염색  • 슬라이드를 Hematoxylin 용액에 3분간 담가 염색한다.  • 염색 후 증류수에 2분간 담가 세척한다. 4. 대조 염색  • 슬라이드를 Eosin 용액에 3분간 담가 염색한다.…

TRIzol RNA extraction 1. 세포 분리  • 96well plate 내 TRIzol을 각각 100µL를 넣고 피펫팅하여 세포를 용해시킨다.  • 세포가 용해된 TRIzol용액을 멸균된 1.5mL EP tube에 옮겨 담는다.  • EP tube에 Chloroform(4℃)을 20µL 추가한다.1)  • EP tube를 15초간 inverting하여 용액이 잘 섞이도록 한다.  • 2-3분 동안 실온에서 보관 후 12,000xg, 15min, 4°C 조건에서 원심분리한다.  • 원심분리 후 분리된 세 개의 층을 확인한다.2) 2. RNA 분리  • 상층의 수용성 상(투명한 액체)을 새 EP tube로 옮긴다.3)  • EP tube에 Isopropanol을 500µL를 추가한다.  • EP tube를 15초간 inverting하여 용액이 잘 섞이도록 한다.  • 2-3분 동안 실온에서 보관 후 12,000xg, 10min, 4°C 조건에서 원심분리한다.  • 원심분리 후 EP tube 바닥에 침전된 RNA 펠렛을 확인한다. 3.…