TRIzol RNA extraction 1. 세포 분리  • 96well plate 내 TRIzol을 각각 100µL를 넣고 피펫팅하여 세포를 용해시킨다.  • 세포가 용해된 TRIzol용액을 멸균된 1.5mL EP tube에 옮겨 담는다.  • EP tube에 Chloroform(4℃)을 20µL 추가한다.1)  • EP tube를 15초간 inverting하여 용액이 잘 섞이도록 한다.  • 2-3분 동안 실온에서 보관 후 12,000xg, 15min, 4°C 조건에서 원심분리한다.  • 원심분리 후 분리된 세 개의 층을 확인한다.2) 2. RNA 분리  • 상층의 수용성 상(투명한 액체)을 새 EP tube로 옮긴다.3)  • EP tube에 Isopropanol을 500µL를 추가한다.  • EP tube를 15초간 inverting하여 용액이 잘 섞이도록 한다.  • 2-3분 동안 실온에서 보관 후 12,000xg, 10min, 4°C 조건에서 원심분리한다.  • 원심분리 후 EP tube 바닥에 침전된 RNA 펠렛을 확인한다. 3.…

1. DPPH 라디칼 소거능 (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 1. 준비  • 3.94 mg의 DPPH를 100 mL의 95% 에탄올에 녹여 0.1 mM 농도의 DPPH 용액1)을 준비한다.  • 용액을 사용 전 30분 동안 빛을 피해 실온에서 안정화시킨다.  • 표준 곡선을 그리기 위해 샘플 및 1mg/mL 아스코르빈산 용액을 1/2배로 여러번 희석하여 준비한다. 2. 반응 혼합  • 96well plate에 100 µL의 DPPH 용액 + 100 µL의 샘플 용액(혹은 아스코르빈산)을 넣는다.  • 대조군으로는 100 µL의 DPPH 용액 + 100 µL의 95% 에탄올 용액을 넣는다. 3. 흡광도 측정  • 마이크로플레이트 리더를 사용하여 517 nm 파장에서 흡광도를 측정한다. 4. 결과분석  • DPPH 소거능을 계산한다. (%) = [(A3)_대조군 – A_샘플) / A_대조군] × 100  • 표준 곡선을 통한 IC504)을 구한 뒤…

1. Medium Preparation (배양 배지 준비)  • 항온조를 37℃로 설정한 후, a.배지, b.소분된 FBS, c.소분된 PS를 적정 온도로 맞춘다.  • 클린벤치 안에서 배지:FBS:PS=100:10:1의 비율로 혼합한다.  • 50mL 코니컬에 배지 명, 날짜를 기입하고 소분한다.  • 파라필름을 이용하여 완전히 밀봉하고 4℃의 환경에 보관한다. 1.5 FBS Heat Inactivation : FBS 내의 보체(Complement)와 같은 활성 성분을 비활성화하여 세포 배양에 불필요한 반응을 방지한다. 1. 준비  • 항온조를 56℃로 설정한다.  • 냉동보관 중인 FBS를 상온 혹은 4℃ 냉장고에서 천천히 해동한다. 2. 비활성화  • FBS를 56°C 항온조에 넣고 30분간 가열한다.1)  • 30분이 지나면 FBS를 꺼내 얼음물 또는 차가운 물에 넣어 빠르게 냉각한다. 1)  • 냉각된 FBS를 필터로 거른 뒤 50mL 코니컬튜브에 소분하여 냉동보관한다.2) —  • 배지: 영양…